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集菌儀-2015版中國(guó)藥典

更新時(shí)間:2016-01-18   點(diǎn)擊次數(shù):3745次

無菌檢查法-2015版中國(guó)藥典

無菌檢查法系用于檢查藥典要求無菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器具、原料、輔料、及其他品種是否無菌的一種方法。若供試品符合無菌檢查法的規(guī)定,僅表明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。
    無菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度B 級(jí)背景下的局部A 級(jí)潔凈度的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行,其全過程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作,防止微生物污染,防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度確認(rèn)。隔離系統(tǒng)應(yīng)定期按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證,其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。日常檢驗(yàn)還需對(duì)試驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控。
    無菌檢查人員必須具備微生物專業(yè)知識(shí),并經(jīng)過無菌技術(shù)的培訓(xùn)。
    培養(yǎng)基
    硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基主要用于厭氧菌的培養(yǎng),也可用于需氣菌培養(yǎng);胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基適用于真菌和需氣菌的培養(yǎng)。培養(yǎng)基的制備及培養(yǎng)條件培養(yǎng)基可按以下處方制備,亦可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。配制后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在225、避光的環(huán)境,若保存于非密閉容器中,一般在3周內(nèi)使用;若保存于密閉容器中,一般可在一年內(nèi)使用。

1. 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基
酪胨 (胰酶水解) 15.0g     酵母浸出粉 5.0g
葡萄糖 5.0g               氯化鈉 2.5g
L-胱氨酸 0.5g             新配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0ml
硫乙醇酸鈉 0.5g           瓊脂 0.75g
(或硫乙醇酸) 0.3 ml)   純化水 1000ml

除葡萄糖和刃天青溶液外,取上述成分混合,微溫溶解,調(diào)節(jié)pH 為弱堿性,煮沸,濾清,加入葡萄糖和刃天青溶液,搖勻,調(diào)節(jié)pH 值使滅菌后為7.1±0.2。分裝至適宜的容器中,其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培2養(yǎng)基氧化層(粉紅色)不超過培養(yǎng)基深度的1/2。滅菌。在供試品接種前,培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過培養(yǎng)基深度的1/5,否則,須經(jīng)100水浴加熱至粉紅色消失(不超過20 分鐘),迅速冷卻,只限加熱一次,并防止被污染。除另有規(guī)定外,硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置3035培養(yǎng)。
    2. 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基
胰酪胨 17.0g                            氯化鈉 5.0g
大豆木瓜蛋白酶消化物 3.0g               磷酸氫二鉀 2.5g
葡萄糖(一水合/無水) 2.5g 2.3g     純化水 1000mL
除葡萄糖外,取上述成分,混合,微溫溶解,濾過,調(diào)節(jié)pH 值使滅菌后在25pH 值為7.3±0.2,加入葡萄糖,分裝,滅菌。胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基置2025培養(yǎng)。
    3. 選擇性培養(yǎng)基
    按上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的處方及制法,在培養(yǎng)基滅菌或使用前加入適宜的中和劑、滅活劑或表面活性劑,其用量同方法適用性試驗(yàn)。
    4. 0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基(用于硫酸鏈霉素等抗生素的無菌檢查)
10.0g              氯化鈉 5.0g
葡萄糖 5.0g           1000 ml
牛肉浸出粉 3.0g
    除葡萄糖外,取上述成分混合,微溫溶解,調(diào)節(jié) pH 為弱堿性,煮沸,加入葡萄糖溶解后,搖勻,濾清,調(diào)節(jié) pH 值使滅菌后在25pH 值為7.2±0.2,分裝,滅菌。
    5. 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基
胰酪胨 15.0g                 氯化鈉 5.0g
大豆木瓜蛋白酶水解物 5.0g    瓊脂 15.0g
純化水 1000ml
    除瓊脂外,取上述成分,混合。微溫溶解,調(diào)節(jié)pH 值使滅菌后在25pH 值為7.3±0.2,加入瓊脂,加熱溶化后,搖勻,分裝,滅菌。
    6.沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基
動(dòng)物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g
葡萄糖 20.0g   純化水 1000mL
    除葡萄糖外,取上述成分,混合,微溫溶解,調(diào)節(jié)pH 值使滅菌后在25pH 值為5.6±0.2,加入葡萄糖,搖勻,分裝,滅菌。
    7. 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基
動(dòng)物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g
葡萄糖 40.0g 純化水 1000mL
瓊脂 15.0g
    除葡萄糖、瓊脂外,取上述成分,混合,微溫溶解,調(diào)節(jié)pH值使滅菌后在25pH值為5.6±0.2,加入瓊脂,加熱溶化后, 再加入葡萄糖,搖勻,分裝,滅菌。
    培養(yǎng)基的適用性檢查
    無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基等應(yīng)符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。本檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時(shí)進(jìn)行。
無菌性檢查 每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5 支(瓶),置各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14 天,應(yīng)無菌生長(zhǎng)。
    靈敏度檢查
    菌種 培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5 代(從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0 代),并采用適宜的菌種保存技術(shù)進(jìn)行保存,以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。
金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CMCC(B) 26 003
銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa) CMCC(B) 10 104
枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)〔CMCCB63 501
生孢梭菌(Clostridium sporogenes)CMCC(B) 64 941
白色念珠菌(Candida albicans)CMCC(F) 98 001
黑曲霉(Aspergillus niger) CMCC(F) 98 003
    菌液制備 接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上,接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中,3035培養(yǎng)1824 小時(shí);接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上,2025培養(yǎng)2448 小時(shí),上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml 含菌數(shù)小于100CFU(菌落形成單位)的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng) 物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上,2025培養(yǎng)57 天,加入35ml 0.05%(v/v)聚山梨酯80 0.9%無菌氯化鈉溶液,將孢子洗脫。然后,采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi),用含0.05%(v/v)聚山梨酯80 0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml 含孢子數(shù)小于100CFU 的孢子懸液。
菌懸液在室溫下放置應(yīng)在2 小時(shí)內(nèi)使用,若保存在28可在24 小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在28,在驗(yàn)證過的貯存期內(nèi)使用。
    培養(yǎng)基接種  取每管裝量為12ml 的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7 支,分別接種小于100CFU 的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2 支,另1 支不接種作為空白對(duì)照,培養(yǎng)3 天;取每管裝量為9ml 的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7 ,分別接種小于100CFU 的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2 支,另1 支不接種作為空白對(duì)照,培養(yǎng)5 天。逐日觀察結(jié)果。
    結(jié)果判定 空白對(duì)照管應(yīng)無菌生長(zhǎng),若加菌的培養(yǎng)基管均生長(zhǎng)良好,判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。
    稀釋液、沖洗液及其制備方法
    稀釋液、沖洗液配制后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。
    1.0.1%蛋白胨水溶液 取蛋白胨1.0g,加水1000ml,微溫溶解,濾清,調(diào)節(jié)pH 值至7.1±0.2,分裝,滅菌。
    2pH7.0 氯化鈉-蛋白胨緩沖液 取磷酸二氫鉀3.56g,磷酸氫二鈉7.23g,氯化鈉4.30g,蛋白胨1.0g,加水1000ml,微溫溶解,濾清,分裝,滅菌。
    3. 根據(jù)供試品的特性,可選用其他經(jīng)驗(yàn)證過的適宜的溶液作為稀釋液、沖洗液(0.9%無菌氯化鈉溶液)
如需要,可在上述稀釋液或沖洗液的滅菌前或滅菌后加入表面活性劑或中和劑等。
    方法適用性試驗(yàn)
    當(dāng)進(jìn)行產(chǎn)品無菌檢查法時(shí),應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗(yàn),以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無菌檢查。若檢驗(yàn)程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí),應(yīng)重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。
    方法適用性試驗(yàn)按供試品的無菌檢查的規(guī)定及下列要求進(jìn)行操作。對(duì)每一試驗(yàn)菌應(yīng)逐一進(jìn)行方法確認(rèn)。
    菌種及菌液制備 除大腸埃希菌(Escherichia coli[CMCC(B) 4 4102〕外,金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉同培養(yǎng)基靈敏度檢查。大腸埃希菌的菌液制備同金黃色葡萄球菌。
    薄膜過濾法 取每種培養(yǎng)基規(guī)定接種的供試品總量按薄膜過濾法過濾,沖洗,在zui后一次的沖洗液中加入小于100CFU 的試驗(yàn)菌,過濾。加硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基至濾筒內(nèi)。另取一裝有同體積培養(yǎng)基的容器,加入等量試驗(yàn)菌,作為對(duì)照。置規(guī)定溫度培養(yǎng)35 天,各試驗(yàn)菌同法操作。
    直接接種法 取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基6 管,分別接入小于100CFU 的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌各2 管,取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基6 管,分別接入小于100CFU 的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2 管。其中1 管接入每支培養(yǎng)基規(guī)定的供試品接種量,另1 管作為對(duì)照,置規(guī)定的溫度培養(yǎng)35 天。
    結(jié)果判斷 與對(duì)照管比較,如含供試品各容器中的試驗(yàn)菌均生長(zhǎng)良好,則說明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計(jì),照此檢查方法和檢查條件進(jìn)行供試品的無菌檢查。 如含供試品的任一容器中的試驗(yàn)菌生長(zhǎng)微弱、緩慢或不生長(zhǎng),則說明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有抑菌作用,應(yīng)采用增加沖洗量、增加培養(yǎng)基的用量、使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法,消除供試品的抑菌作用,并重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。
    方法適用性試驗(yàn)也可與供試品的無菌檢查同時(shí)進(jìn)行。
    供試品的無菌檢查
    無菌檢查法包括薄膜過濾法和直接接種法。只要供試品性質(zhì)允許,應(yīng)采用薄膜過濾法。供試品無菌檢查所采用的檢查方法和檢驗(yàn)條件應(yīng)與方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法相同。
    無菌試驗(yàn)過程中,若需使用表面活性劑、滅活劑、中和劑等試劑,應(yīng)證明其有效性,且對(duì)微生物無毒性。
    檢驗(yàn)數(shù)量 檢驗(yàn)數(shù)量是指一次試驗(yàn)所用供試品zui小包裝容器的數(shù)量。除另有規(guī)定外,出廠產(chǎn)品按表1 規(guī)定;上市產(chǎn)品監(jiān)督檢驗(yàn)按表2 規(guī)定。表1、表2中zui少檢驗(yàn)數(shù)量不包括陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)的供試品用量。
    檢驗(yàn)量 是指供試品每個(gè)zui小包裝接種至每份培養(yǎng)基的zui小量(g ml)。除另有規(guī)定外,供試品檢驗(yàn)量按表3 規(guī)定。若每支(瓶)供試品的裝量按規(guī)定足夠接種兩種培養(yǎng)基,則應(yīng)分別接種硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。采用薄膜過濾法時(shí),只要供試品特性允許,應(yīng)將所有容器內(nèi)的全部?jī)?nèi)容物過濾。
    陽(yáng)性對(duì)照 應(yīng)根據(jù)供試品特性選擇陽(yáng)性對(duì)照菌:無抑菌作用及抗革蘭陽(yáng)性菌為主的供試品,以金黃色葡萄球菌為對(duì)照菌;抗革蘭陰性菌為主的供試品以大腸埃希菌為對(duì)照菌;抗厭氧菌的供試品,以生孢梭菌為對(duì)照菌;抗真菌的供試品,以白色念珠菌為對(duì)照菌。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)的菌液制備同方法適用性試驗(yàn),加菌量小于100CFU,供試品用量同供試品無菌檢查時(shí)每份培養(yǎng)基接種的樣品量。陽(yáng)性對(duì)照管培養(yǎng)4872 小時(shí)應(yīng)生長(zhǎng)良好。
    陰性對(duì)照 供試品無菌檢查時(shí),應(yīng)取相應(yīng)溶劑和稀釋液、沖洗液同法操作,作為陰性對(duì)照。陰性對(duì)照不得有菌生長(zhǎng)。
    供試品處理及接種培養(yǎng)基
    操作時(shí),用適宜的消毒液對(duì)供試品容器表面進(jìn)行*消毒,如果供試品容器內(nèi)有一定的真空度,可用適宜的無菌器材(如帶有除菌過濾器的針頭)向容器內(nèi)導(dǎo)入無菌空氣,再按無菌操作啟開容器取出內(nèi)容物。除另有規(guī)定外,按下列方法進(jìn)行供試品處理及接種培養(yǎng)基。
    1.薄膜過濾法
    薄膜過濾法應(yīng)采用封閉式薄膜過濾器。無菌檢查用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45μm。直徑約為50mm。根據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)。抗生素供試品應(yīng)選擇低吸附的濾器及濾膜。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。使用時(shí),應(yīng)保證濾膜在過濾前后的完整性。
    水溶性供試液過濾前應(yīng)先將少量的沖洗液過濾以潤(rùn)濕濾膜。油類供試品,其濾膜和過濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的zui大過濾效率,應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過濾后,若需要用沖洗液沖洗濾膜,每張濾膜每次沖洗量一般為100ml,且總沖洗量不得超過1000ml,以避免濾膜上的微生物受損傷。
    水溶液供試品 取規(guī)定量,直接過濾,或混合至含不少于100ml 適宜稀釋液的無菌容器中,混勻,立即過濾。如供試品具有抑菌作用,須用沖洗液沖洗濾膜,沖洗次數(shù)一般不少于三次,所用的沖洗量、沖洗方法同方法適用性試驗(yàn)。除生物制品外,一般樣品沖洗后,1 份濾器加入100ml 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基,1 份濾器加入100ml 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。生物制品樣品沖洗后, 2 份濾器加入100ml 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基,1 份濾器加入100ml 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。
    水溶性固體供試品 取規(guī)定量,加適宜的稀釋液溶解或按標(biāo)簽說明復(fù)溶,然后照水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。
    非水溶性供試品 取規(guī)定量,直接過濾;或混合溶于適量含聚山梨酯80或其他適宜乳化劑的稀釋液中,充分混合,立即過濾。用含0.11%聚山梨酯80 的沖洗液沖洗濾膜至少3 次。加入含或不含聚山梨酯80 的培養(yǎng)基。接種培養(yǎng)基照水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。
    可溶于十四烷酸異丙酯的膏劑和粘性油劑供試品 取規(guī)定量,混合至適量的無菌十四烷酸異丙酯中,劇烈振搖,使供試品充分溶解,如果需要可適當(dāng)加熱,但溫度不得超過44,趁熱迅速過濾。對(duì)仍然無法過濾的供試品,于含有適量的無菌十四烷酸異丙酯中的供試液中加入不少于100ml 的稀釋液,充分振搖萃取,靜置,取下層水相作為供試液過濾。過濾后濾膜沖洗及接種培養(yǎng)基照非水溶性制劑供試品項(xiàng)下的方法操作。
    無菌氣(噴)霧劑供試品 取規(guī)定量,將各容器置-20以下的冰室冷凍約1 小時(shí)。以無菌操作迅速在容器上端鉆一小孔,釋放拋射劑后再無菌開啟容器,并將供試液轉(zhuǎn)移至無菌容器中,然后照水溶液或非水溶性制劑供試品項(xiàng)下的方法操作。
    裝有藥物的注射器供試品 取規(guī)定量,將注射器中的內(nèi)容物(若需要可吸入稀釋液或標(biāo)簽所示的溶劑溶解)直接過濾,或混合至含適宜稀釋液的無菌容器中,然后按水溶液或非水溶性供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用適宜的方法進(jìn)行包裝中所配帶的無菌針頭的無菌檢查。
    具有導(dǎo)管的醫(yī)療器具(輸血、輸液袋等)供試品 取規(guī)定量,每個(gè)zui小包裝用50100ml 沖洗液分別沖洗內(nèi)壁,收集沖洗液于無菌容器中,然后照水溶液供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用直接接種法進(jìn)行包裝中所配帶的針頭的無菌檢查。
    2. 直接接種法
    直接接種法適用于無法用薄膜過濾法進(jìn)行無菌檢查的供試品,即取規(guī)定量供試品分別等量接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。除生物制品外,一般樣品無菌檢查時(shí)兩種培養(yǎng)基接種的支/瓶數(shù)相等;生物制品無菌檢查時(shí)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基接種的支/瓶數(shù)為21。除另有規(guī)定外,每個(gè)容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的10%,同時(shí),硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于15ml,胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基每管裝量不少于10ml。供試品檢查時(shí),培養(yǎng)基的用量和高度同方法適用性試驗(yàn)。
    混懸液等非澄清水溶液供試品 取規(guī)定量,等量接種至各管培養(yǎng)基中。
固體供試品 取規(guī)定量,直接等量接種至各管培養(yǎng)基中?;蚣尤脒m宜的溶劑溶解,或按標(biāo)簽說明復(fù)溶后,取規(guī)定量等量接種至各管培養(yǎng)基中。
    非水溶性供試品 取規(guī)定量,混合,加入適量的聚山梨酯80 或其它適宜的乳化劑及稀釋劑使其乳化,等量接種至各管培養(yǎng)基中?;蛑苯拥攘拷臃N至含聚山梨酯80 或其它適宜乳化劑的各管培養(yǎng)基中。
敷料供試品 取規(guī)定數(shù)量,以無菌操作拆開每個(gè)包裝,于不同部位剪取約100mg 1cm×3cm 的供試品,等量接種于各管足以浸沒供試品的適量培養(yǎng)基中。
    腸線、縫合線等供試品 腸線、縫合線及其它一次性使用的醫(yī)用材料按規(guī)定量取zui小包裝,無菌拆開包裝,等量接種于各管足以浸沒供試品的適量培養(yǎng)基中。
    滅菌醫(yī)用器具供試品 取規(guī)定量,必要時(shí)應(yīng)將其拆散或切成小碎段,等量接種于各管足以浸沒供試品的適量培養(yǎng)基中。
    放射性藥品 取供試品1 (),等量接種于裝量為7.5ml 的硫乙醇酸流液體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。每管接種量為0.2ml
    培養(yǎng)及觀察
    將上述接種供試品后的培養(yǎng)基容器分別按各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天;接種生物制品供試品的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的容器應(yīng)分成兩等份,一份置3035培養(yǎng),一份置2025培養(yǎng)。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)。如在加入供試品后或在培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁,培養(yǎng)14 天后,不能從外觀上判斷有無微生物生長(zhǎng),可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中,培養(yǎng)3 天,觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁;或取培養(yǎng)液涂片,染色,鏡檢,判斷是否有菌。
    結(jié)果判斷
陽(yáng)性對(duì)照管應(yīng)生長(zhǎng)良好,陰性對(duì)照管不得有菌生長(zhǎng)。否則,試驗(yàn)無效。若供試品管均澄清,或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長(zhǎng),判供試品符合規(guī)定;若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng),判供試品不符合規(guī)定,除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無效,即生長(zhǎng)的微生物非供試品所含。當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件時(shí)方可判試驗(yàn)結(jié)果無效:
1)無菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法的要求。
2)回顧無菌試驗(yàn)過程,發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素。
3)供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后,確證是因無菌試驗(yàn)中所使用的物品和(或)無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。
    試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無效,應(yīng)重試。重試時(shí),重新取同量供試品,依法檢查,若無菌生長(zhǎng),判供試品符合規(guī)定;若有菌生長(zhǎng),判供試品不符合規(guī)定。

 
1 批出廠產(chǎn)品及生物制品的原液和半成品zui少檢驗(yàn)數(shù)量

 

    注:若供試品每個(gè)容器內(nèi)的裝量不夠接種兩種培養(yǎng)基,那么表中的zui少檢驗(yàn)數(shù)量加倍

 

2. 上市抽驗(yàn)樣品的zui少檢驗(yàn)數(shù)量

 


    注:1.若供試品每個(gè)容器內(nèi)的裝量不夠接種兩種培養(yǎng)基,那么表中的zui少檢驗(yàn)數(shù)量加倍。
        2.抗生素粉針劑(≥5 克)及抗生素原料藥(≥5 克)的zui少檢驗(yàn)數(shù)量為6 瓶(或支)。桶裝固體原料的zui少檢驗(yàn)數(shù)量為4 個(gè)包裝。

3. 供試品的zui少檢驗(yàn)量

 

    注: 如果醫(yī)用器械體積過大,培養(yǎng)基用量可在2000ml 以上,將其*浸沒。

 

    說明:
    1.無菌檢查法收載于《中國(guó)藥典》一、二、三部附錄中,一部和二部?jī)?nèi)容一致。
    2.本稿以2010 年版二部的無菌檢查法為基礎(chǔ)進(jìn)行中的內(nèi)容進(jìn)行一、二及三部?jī)?nèi)容的整合,并進(jìn)行了修訂。
    3..整合稿保留了生物制品無菌檢查法的特點(diǎn),如檢驗(yàn)數(shù)量、硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基接種份數(shù)和培養(yǎng)溫度等。
    4..修訂稿中檢驗(yàn)環(huán)境修訂為“B 級(jí)背景下的A 級(jí)。
    5.改良馬丁培養(yǎng)基修訂為胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。
    6.方法驗(yàn)證試驗(yàn)修訂為方法適用性試驗(yàn)。
    7.由于培養(yǎng)基的改變,培養(yǎng)基的靈敏度和方法適用性試驗(yàn)也進(jìn)行了修訂。
    8.修訂了表1、表2、表3 的內(nèi)容。

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